探索伤口愈合的奥秘！为小鼠进行MDK调控

帝诺战略携手南京医科大学

Midkine(MDK)是一种分泌型肝素结合生长因子，为低分子量的蛋白质。Midkine在发育过程中发挥着重要作用，并在妊娠中期强烈表达。在成人中，它的表达局限于某些组织。Midkine促进细胞存活和迁移，并深入参与癌症进展、炎症性疾病的发生和损伤组织的修复。

实验过程选用成年雄性ICR小鼠(20 25g)，动物被随机分成组。用剃毛刀将小鼠右下肢的毛发剔除，并用脱毛膏脱净毛发。将小鼠固定在固定器中，露出右下肢，将电极片剪成0.5cm²左右大小后分别贴于小鼠小腿内外两侧，通过实验研究结果如下：

图1

电刺激增加血浆中MDK释放

图1显示不同电流强度电刺激小鼠后血浆中的MDK 水平。电刺激小鼠右下肢(100Hz，1小时，连续三天)，处死老鼠，取血(n＝4)。Western blot 检测血浆中MDK水平。分别以三种电流强度刺激小鼠右下肢，结果显示，2 20mA/cm2的平均电流强度均可引起血浆MDK上升，6mA/cm 2时产生的MDK水平最高。

图2

电刺激增加了坐骨神经中MDK表达

图2显示不同电流强度电刺激小鼠后坐骨神经中的MDK水平，电刺激小鼠右下肢(100Hz，1小时，连续三天)，处死老鼠，取坐骨神经(n＝ 4)。Western blot检测坐骨神经中MDK、磷酸化的AMPK和MDK受体LRP1水平。分别以三种电流强度刺激小鼠右下肢，6mA/cm2时坐骨神经中产生的MDK水平及MDK受体LRP1表达最高，而 AMPK活性无明显变化。

图3

电刺激增加了肌肉组织中MDK表达

图3显示不同电流强度电刺激小鼠后肌肉组织中的MDK水平，电刺激小鼠右下肢(100Hz，1小时，连续三天)，处死老鼠，取右腿肌肉组织 (n＝4)。Western blot检测肌肉组织中MDK、磷酸化的AMPK和MDK受体LRP1水平。分别以三种电流强度刺激小鼠右下肢，MDK和AMPK活化呈现出电流剂量依赖性增加的趋势，其中6mA/ cm 2时MDK受体LRP1表达最高。

图4

电刺激可以增加坐骨神经MDK表达

图4显示不同频率电刺激小鼠后坐骨神经中的MDK水平，电刺激小鼠右下肢(6mA/cm2，1小时，连续三天)，处死老鼠，取坐骨神经(n＝5)。 Western blot检测坐骨神经中MDK、MDK受体LRP1水平，P＜0 .05vs 0Hz。分别以三种频率刺激小鼠右下肢，结果表明坐骨神经中MDK和LRP1水平对电刺激的频率变化不敏感。

图5

电刺激可以增加肌肉MDK表达

图5显示不同频率电刺激小鼠后肌肉中的MDK水平，电刺激小鼠右下肢(6mA/cm2，1小时，连续三天)，处死老鼠，分别取左腿和右腿肌肉(n＝ 3)。Western blot检测双腿中MDK水平。分别以三种频率刺激小鼠右下肢，结果表明不同频率对于肌肉中MDK水平影响不大。电刺激不会影响到远隔部位肌肉中MDK的水平。

图6

电刺激可以电刺激增加血浆中MDK释放

图6显示电刺激小鼠后血浆中的MDK水平。电刺激小鼠右下肢(100Hz，6mA/cm2，连续三天)，处死老鼠，取血(n＝4)。Western blot 检测血浆中MDK水平。分别以三种时程电刺激刺激小鼠右下肢，每天电刺激1h时全身血液中 MDK水平最高。

图7

电刺激可以增加肌肉MDK表达

图7显示电刺激小鼠后肌肉中的MDK水平，电刺激小鼠右下肢(100Hz，6mA/cm2，连续三天)，处死老鼠，取右腿肌肉(n＝4)。Western blot检测右腿中MDK、LRP1和磷酸化AMPK水平。每天电刺激0 .5h即可引起肌肉中MDK水平升高，并且随电刺激时长的增加而增加。但是每天电刺激1 .5h时部分小鼠出现了皮肤损伤。0 .5h 1 .5h的电刺激可以增加AMPK的激活和LRP1水平。

图8

电刺激可以增加C2C12成肌细胞MDK释放

图8为电刺激C2C12细胞(20Hz，100μ A)，(n＝3)，Western blot检测细胞上清中MDK水平和细胞的MDK受体LRP1水平，P＜0 .05vs 0h。分别电刺激肌肉细胞0 .5h，1h，6h和12h后，结果表明，电刺激0 .5h和1h时，肌肉细胞释放 MDK较多，MDK受体LRP1水平最高。